PCR 全過程包括三個基本步驟,即雙鏈 DNA 模板加熱變性成單鏈(變性);在低溫下引物與單鏈DNA互補配對(退火);在適宜溫度下 Taq DNA 聚合酶以單鏈 DNA 為模板,利用4種脫氧核苷三磷酸(dNTP)催化引物引導的 DNA 合成(延伸)。這三個基本步驟構(gòu)成的循環(huán)重復進行,可使特異性 DNA 擴增達到數(shù)百萬倍。
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標之一,但不能反映試劑質(zhì)量的全部。試劑成份、純度、用量及穩(wěn)定性,才是保證試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在。目前市售的一些試劑具有抗干擾作用,主要是通過加入抗干擾物質(zhì)或使用新的色素原以避免內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。
擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應該注意
一種免疫標記技術(shù)。用于檢測相應抗原或抗體。即用熒光素與抗體連接成熒光抗體,再與待檢標本中的抗原反應,置熒光顯微鏡下觀察,抗原抗體復合物散發(fā)出熒光,借此對標本中的抗原進行鑒定或定位。
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在 -80℃ 條件下可保存數(shù)年。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系(穩(wěn)定表達細胞株)指在細胞中持續(xù)穩(wěn)定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上,使細胞長期穩(wěn)定表達該基因。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株包括多克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株和單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。慢病毒感染目的細胞后,通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細胞中經(jīng)細胞克隆挑選得到的,由一個細胞擴增得到的細胞株。單克隆細胞株性狀統(tǒng)一,傳代過程中細胞的基因表達保持穩(wěn)定。